jueves, 9 de junio de 2011

tecnica de tincion de gram investigacion

Técnica de tinción de gram investigación


La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.
Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante. Una posible teoría del mecanismo de tinción es la siguiente:
Técnica de la coloración gram
Fijar un frotis
• Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
• Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
• Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.
• Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina.
• Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
Tinción
Con violeta cristal, violeta de genciana, azul de metileno o en todo caso tinta china utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 °C.
Enjuague
Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un milímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina portaobjetos en posición inclinada hacia abajo... La solución de cristal violeta, se recomienda sea al 1%
Mordiente
Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 3 minuto más. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su fijación a las bacterias.
Decoloración
Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul.
Lavado y secado
Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.
Tinción de contraste
Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.
Nuevo enjuague
Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita.
De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su respectiva observación microscópica.
Bacterias resistentes a la tinción Gram
La siguientes bacterias de naturaleza grampositiva, tiñen como gramnegativas:
• Mycobacterias (están encapsuladas).
• Mycoplasmas (no tienen pared).
• Formas L (pérdida ocasional de la pared).
• Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared, respectivamente).
En el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones:
• Identificación preliminar de la bacteria causal de la infección.
• Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados así como la atmósfera de incubación.
A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibrios.
Fundamentos de diferenciación de Gram positivo y Gram negativo
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.


Bibliografía
www.wikipedia.com

practica#6 uso y manejo de materiales de laboratorio 'elaboracion de reactivo( medio de cultivo)

objetivo:
el alumno laboratorista clinico aprendera a utilizar un reactivo denominado medio de cultivo el cual requier la aplicacion de conocmientosd de materiales de lab. equipos de apoyo y cientificos de elaboracion lo que ayudara a complementar su aprendizaje por descubrimiento.

introduccion:
dentro del lab. de anlisis clinicos se maneja una gana de materiales y equipos asi como reactivos pinturas, y algunos otros de forma especial que en base a la trallectoria que llege ira conociendo e identificando de acuerdo a cada una de las competencias profecionales que al final de su act. aulica tendra los conocimientos y la formacion pofresional en base alas competencias genericas y disiplinares.

cuadro teorico:
es esta area el alumno tomara en cuenta conocimientos anterior mente visto en base a los matericales del lab. uso y manejo de los mismo y la aplicacion de ellos para la elaboracion de reactivos , tomando en parte las importante en las competencias y disiplinares aplicada en sus act. en la investigacion individuol y grupal ya que se requiere de las blibliografias escritas, y digitales paras terminar un producto que le dara derecho a tener un conomiento general en forma individual.

materiales:
-baso de precepitado 250ml
matraz elemayer 250ml
barilla de cristal
vidrio de reloj
espatula
proveta graduada
cajas petris
papel secante
papel cubre mesa
cinta
[plumon permanente
torundas de algodon
gasa esteril
material de apoto
mesa de lab
autoclave
balanza granataria
2 mecheros de buzen
reactivos
agua destilada
medio de cultivo

instrucciones:
el alumno, debera de portar su equipo de bioseguridad completo, y llenar las hora de lab. , cubrir la mesa con papel , tomar los materiales de cristalerica y conectar los mecheros , la balanza debera estar lista paras su uso una ves teniendo todo se podra llevar acavo las prpactica
agua destilada la cantidad necesaria, reactivos, un frasco de plastico con tapa roscada en cantidad 4500 gr y el que se ba a redritar una pequena cantifad para lo que e lalumno debera realizar regla de 3 y tomar polvo exclusivamente para su caja petri, una ves teniendo los materiales listo, de pesar el polvo y depositarlo en sus resipientes para su mezcla soluto y solvente se agirata de forma circular para que los glandulos se si disuelvan, de preferencia el polvo utilizado se vierte en el matraz elemayer, que contiene agua, para evitar perdidas de reactivo, despues del tiempo reposado se tamponea con torundas de algodon y gasas se ajustas con tela maquistape, que se le aplicara un tramo de cinta, testigo y se etiquetada con el dato del cultivo y del numero de mesa y se introducira al auto clave,
NOTA:
el equipo de apoyo debe de estar listo desde el inicio de la practica. una ves eterilizando el producto se retira de la autoclave, se entraga alos intregrantes y se deja enfriar, se activan los mecheros para su nueva entrada al campo de esterilizacion por radiaccion por calor llamado campo teril, para evitar que se contamine el producto, una ves realizada estas operacion se bacea en caja petric se flamea con el mechero preciamente para secardo mas rapido del vapor que se precentas , se deja solidificarse unas vesr terminadas esta operacion se tapas y se etiquetas con la fehca y nombre del medio de cultivo.

Reporte practica # 5 uso y manejo de materiales de laboratorio 'preparacion de soluciones'

Material
-matras elemayer
-matraz amorado
-barilla de cristal
-espatula
-vasos de precepitado
--vidrio de reloj
-pipetas graduadas del 1-10
-gadilla
-balanza de granataria
-papel cubre mesa
-mesa de laboratorio
Al llegar al lab. Nos colocamos el equipo de bioseguridad para poder realizar la practica, tomando en cuenta que para empezar tenemos que forrar la mesa, para poder poner el material de apoyo y para poder realizar la practica esta practica, , preparando a solución con ayuda de las pipetas graduadas, para preparar sal con agua y usando el matraz elemayer y la barilla de cristal, con ayuda de la balanza paras pesar la sal y azúcar con apoyo de la regla de tres después de preparar la solución la basiamos al matraz amorado y de ahí utilizando las pipetas para tener mayor cantidades exactas y poner las soluciones en tubos de ensaye, después de realizar las dos soluciones se miro que para poder realizar la segunda era el mismo procedimiento que la primera tomando en cuenta que no eran los mismo pesos .

practica # 5 uso y manejo de materiales de laboratorio 'preparacion de soluciones'

objetivo: el alumno tecnico laboratorista aprendera a realizar un reactivo utilizando soluto, y solvente dentro de la practica del laboratorio clinico que le daras el aprendizaje al conocimiento ,por descubrimiento en soluciones cloruro de sodio , solicion acuosa y sulfato de zinc

introduccion: Los materiles del laboratorio son de importanci paras el alumo en su aprendizaje que le ayudaran a mejorar su conocimiento en el manejor y uso de los mismos , teniendo en cuentea que deberan aplicar los conocmientos tematicaso en porcentaje para las elaboracion de sus soluciones a 9% de cloruro de sodio al 10% de glucosa y al 33% de sulfato de zinc

marco teorico: en este se debe tomar en cuenta el tipo de act. realizadas los materiales del lab. utilizaran los equipos de apoyo y los reactivos' soluto y solvente' que le ayudaran a realizar un producto como reactivo elaborado al final seguido breve de una investigacion de ambosd elementos y la lacacion del laboratorio.


materiales:
--matras elemayer
-matraz amorado
-barilla de cristal
-espatula
-vasos de precepitado
--vidrio de reloj
-pipetas graduadas del 1-10
-gadilla
-balanza de granataria
-papel cubre mesa
-mesa de laboratorio

reactivos: agua destilizada, azucar, y sal de mesa

instruciones:
El alumno debe porta el equipo de bioseguridad completo
tomar la hoja de materiales del laboratorio, vestir la mesa de laboratorio, y empezar a realizar su practica, al finalizar debera entregar un reporte, individual.

viernes, 3 de junio de 2011

reporte de la practica#4 manejo de materiales de laboratorio ' pipetas graduadas'

materiales
-tubos de ensaye
-cubeta para equipo especial
-probeta graduada
-vaso de precepitado
-pipeta de tomas
-pipeta de sally
-pipeta de pasteur
-perilla
-papel cubre mesa
-mesa de laboratorio
-agua corriente
-papel secante

al llegar al lab, de analisis al entrar al laboratorio nos colocamos el equipo de bioseguridad para realizar la practica colocamos papel cubre mesa llenando el baso de presepitado de agua corriente utilizando las diferentes pipetas graduadas, haciendo llenados de agua los tubos de ensaye paa hacer la practica y saber manipular las diferentes pipetas, al ver que unas pipetas se puede hacer mejor el llando de las pipetas por la perilla y otras por un filtro despues de ver cuales son las pipetas un poco dificil por que unas las podemos subcionar por el filtro que unas las podemos subcionar al ver el profesor que estabamos haciendo la practica nosmostro como utilizar la pipeta automatica con una breve explicacion de como usarla y como no usarla al explicar el maestro nos mostro como utilisar el tubo de wiltroben que el llenado del tubo es llenarlo con la pipeta de thomas sin que tenga borbujas teniendo en cuenta que cada pipeta tenga su propia manera de pipeteo.

practica#4 manejo de materiales de laboratorio ' pipetas graduadas'

objtivo:
el alumno laboratorista clinico aprendera a utilizar los materiales graduados del grupo de las pipetas

introduccion
los materiales de cristaleria con graduaciones instructuradas en sus paredes sirven para la ensenansa y el aprendizaje que el alumno obtendra durante su manejor y uso en las actividades practicas que requieren medicion en volumenes siendo que su aprendizaje por descubrimiento le dara la seguridad y aptitud del manejo del equipo

materiales
-pipetas graduadas
-pipetas volumetricas
-pipeta de sally
-pipeta pasteul
-pipeta thomas
-pipeta automatica
nota : cada uno de estos equipos consta de diferente graduaccion por lo que el alumno debe ser muy cuidadosos por su manejo y registro
-tubos de ensaye
-cubeta para equipo especial
-espectocometro
-ascar
-monarca
-agua destilada

desarrollo
solicitar vale para materiales en el cual deben anotar todo el material necesario para la practica
papel cubre mesa, maquis tape, una ves teniendo los materiales el alumno debera utilizar una hoja cuadriculada para registrar sus actividades de mesa lo que debe ser individual, cada ua de las pipetas que van ha manejar deben ser utilizadas por subccion , o con perilla y el manejo de la pipeta automatica, el cual esta graduada que contiene numeros en su costado para el manejo de forma circular la perilla de esta pipeta se debe de utilizar con sumo cuidado ya que es muy delicada y es muy costosa , para poder utilizar estos mareriales se deben utilizar 2 de cristaleria, baso de precepitado de 100ml y los tubos de ensayo de 1 hasta 10 ml utilizando la variedad de pipetas y en los positos para equipo especial se debe de utilizar la pipeta automarica en 10, 20, 40, y 80 microlitro.

reporte de la practica # 3 tecnica de esterilizacion por calor humero 'autoclave'

materiales
-mesa de laboratorio
-autoclave
-matraz elemayer
-agua corriente

al llegar al laboratorio lo primero que hicimos fue colocarnos el equipo de bioseguridas se colocaron 4000ml de agua corriente a la altura de la parrilla espues se conecto a la corriente electrica y se activo el boton de encendido , se prendio por 20 minutos de la cual la tapa quedo sobre puesta con el agua para que irviera por los 20 minutos

8:07
despues se cerro y se espero a que llegara a 5 el manometro para bajar la temperatura a 0 y poder subirla de nuevo para que llegara a las 15 libras de precion llegando hasi tambien alos 120 grados esperando 20 minutos mas para que llege a cero a pagarla ,